Molly Stevens: A new way to grow bone

Tradutor: Carlos Espírito Santo Revisora: Kiara Braga

As humans, it's in our nature

Como humanos, está na nossa natureza

to want to improve our health and minimize our suffering.

querer melhorar a nossa saúde e minimizar o nosso sofrimento.

Whatever life throws at us,

O que quer que a vida nos reserve,

whether it's cancer, diabetes, heart disease,

seja cancro, diabetes, doença cardíaca,

or even broken bones, we want to try and get better.

ou até ossos partidos, nós queremos melhorar.

Now I'm head of a biomaterials lab,

Actualmente, sou chefe num laboratório de biomateriais,

and I'm really fascinated by the way that humans

e estou realmente fascinada pelo modo como os humanos

have used materials in really creative ways

têm usado estes materiais no corpo de formas realmente criativas,

in the body over time.

ao longo dos tempos.

Take, for example, this beautiful blue nacre shell.

Considerem, por exemplo, esta bela concha de nácar azul.

This was actually used by the Mayans

Foi utilizada pelos maias

as an artificial tooth replacement.

como dente postiço.

We're not quite sure why they did it.

Não sabemos ao certo porque o faziam.

It's hard. It's durable.

É resistente. É durável.

But it also had other very nice properties.

Mas também tem outras propriedades muito boas.

In fact, when they put it into the jawbone,

De facto, quando colocada no osso do maxilar,

it could integrate into the jaw,

pode integrar-se no maxilar.

and we know now with very sophisticated

Sabemos agora,

imaging technologies

com tecnologia de imagem muito sofisticada,

that part of that integration comes from the fact

que parte dessa integração resulta do facto

that this material is designed

de que este material é desenhado

in a very specific way, has a beautiful chemistry,

de um modo muito específico, tem uma química bela,

has a beautiful architecture.

tem uma bela arquitectura.

And I think in many ways we can sort of think

Penso que, de muitos modos, podemos pensar

of the use of the blue nacre shell and the Mayans

no uso do nácar azul e nos maias

as the first real application

como a primeira verdadeira aplicação

of the bluetooth technology.

da tecnologia "bluetooth".

(Laughter)

(Risos)

But if we move on and think throughout history

Mas se pensarmos como, ao longo da história,

how people have used different materials in the body,

as pessoas usaram diferentes materiais no corpo,

very often it's been physicians

com frequência os médicos foram muito criativos.

that have been quite creative.

They've taken things off the shelf.

Concretizaram coisas.

One of my favorite examples

Um dos exemplos que prefiro

is that of Sir Harold Ridley,

é o de Sir Harold Ridley,

who was a famous ophthalmologist,

famoso oftalmologista

or at least became a famous ophthalmologist.

— pelo menos tornou-se um famoso oftalmologista. —

And during World War II, what he would see

Durante a 2ª Guerra Mundial, reparou que

would be pilots coming back from their missions,

os pilotos que regressavam das suas missões,

and he noticed that within their eyes

tinham pequenas lascas

they had shards of small bits of material

lodged within the eye,

alojadas nos olhos.

but the very interesting thing about it

Mas o mais interessante

was that material, actually, wasn't causing

é que o material não causava nenhuma inflamação.

any inflammatory response.

So he looked into this, and he figured out

Então prestou atenção e descobriu

that actually that material was little shards of plastic

que o material era de pequenas lascas de plástico

that were coming from the canopy of the Spitfires.

provenientes da canópia dos Spitfires.

And this led him to propose that material

Isso levou a que propusesse esse material

as a new material for intraocular lenses.

para novas lentes intraoculares.

It's called PMMA, and it's now used

É designado por PMMA e é agora usado

in millions of people every year

em milhões de pessoas todos os anos

and helps in preventing cataracts.

e ajuda a prevenir cataratas.

And that example, I think, is a really nice one,

Penso que esse exemplo é muito bom

because it helps remind us that in the early days,

porque nos ajuda a recordar que, nos primeiros tempos,

people often chose materials

os materiais eram escolhidos

because they were bioinert.

por serem bioinertes.

Their very purpose was to perform a mechanical function.

O objectivo era desempenharem uma função mecânica.

You'd put them in the body

Seriam colocados no corpo

and you wouldn't get an adverse response.

e não haveria uma reação adversa.

And what I want to show you is that

E o que quero mostrar-vos

in regenerative medicine,

é que, na medicina regenerativa,

we've really shifted away from that idea

nos afastámos dessa ideia

of taking a bioinert material.

de usar material bioinerte.

We're actually actively looking for materials

Procuramos activamente materiais

that will be bioactive, that will interact with the body,

que sejam bioactivos, que interajam com o corpo

and that furthermore we can put in the body,

e que, além disso, possamos colocá-los no corpo,

they'll have their function,

que desempenhem a sua função,

and then they'll dissolve away over time.

e depois que se dissolvam com o tempo.

If we look at this schematic,

Se virmos este esquema,

this is showing you what we think of

mostra-vos o que consideramos

as the typical tissue-engineering approach.

a abordagem típica de engenharia de tecidos.

We have cells there, typically from the patient.

Temos células, tipicamente do paciente,

We can put those onto a material,

podemos colocá-las num material,

and we can make that material very complex if we want to,

e podemos tornar esse material muito complexo se quisermos.

and we can then grow that up in the lab

Podemos criar isso no laboratório

or we can put it straight back into the patient.

ou podemos colocá-lo de volta no paciente.

And this is an approach that's used all over the world,

Esta é uma abordagem usada em todo o mundo,

including in our lab.

incluindo o nosso laboratório.

But one of the things that's really important

Mas uma coisa realmente importante,

when we're thinking about stem cells

quando pensamos em células estaminais,

is that obviously stem cells can be many different things,

é que obviamente podem ser coisas muito diferentes,

and they want to be many different things,

e querem ser coisas muito diferentes.

and so we want to make sure that the environment

Por isso queremos garantir que o ambiente

we put them into has enough information

em que as colocamos tem informação suficiente

so that they can become the right sort

para que possam tornar-se o tipo correto

of specialist tissue.

de tecido especializado.

And if we think about the different types of tissues

Se pensarmos nos diferentes tipos de tecidos

that people are looking at regenerating

que as pessoas procuram regenerar

all over the world, in all the different labs in the world,

em todo o mundo, em todos os laboratórios do mundo,

there's pretty much every tissue you can think of.

são praticamente todos os tecidos em que se pode pensar.

And actually, the structure of those tissues

Na verdade, a estrutura desses tecidos

is quite different, and it's going to really depend

é muito diferente, e dependerá realmente

on whether your patient has any underlying disease,

de o nosso paciente ter uma doença subjacente,

other conditions, in terms of how

de outras condições,

you're going to regenerate your tissue,

do modo como irão regenerar os vossos tecidos.

and you're going to need to think about the materials

Temos de pensar nos materiais

you're going to use really carefully,

que usaremos, com muita atenção,

their biochemistry, their mechanics,

na sua bioquímica, na sua mecânica,

and many other properties as well.

e em muitas outras propriedades também.

Our tissues all have very different abilities to regenerate,

Todos os nossos tecidos têm diferentes capacidades de regenerar.

and here we see poor Prometheus,

Vemos aqui o pobre Prometeu,

who made a rather tricky career choice

que escolheu uma carreira complicada

and was punished by the Greek gods.

e foi castigado pelos deuses gregos.

He was tied to a rock, and an eagle would come

Foi amarrado a uma rocha.

Todos os dias aparecia uma águia que lhe comia o fígado.

every day to eat his liver.

But of course his liver would regenerate every day,

Mas, claro, o fígado regenerava todos os dias.

and so day after day he was punished

Assim, dia após dia, ele foi castigado

for eternity by the gods.

para a eternidade pelos deuses.

And liver will regenerate in this very nice way,

O fígado regenera deste modo curioso

but actually if we think of other tissues,

mas, se pensarmos noutros tecidos,

like cartilage, for example,

como a cartilagem, por exemplo,

even the simplest nick and you're going to find it

basta o menor corte, e acharão mesmo difícil

really difficult to regenerate your cartilage.

regenerar a vossa cartilagem.

So it's going to be very different from tissue to tissue.

Assim, é muito diferente de tecido para tecido.

Now, bone is somewhere in between,

O osso é um caso intermédio,

and this is one of the tissues that we work on a lot in our lab.

é um dos tecidos que trabalhamos muito no nosso laboratório.

And bone is actually quite good at repairing.

O osso repara-se muito facilmente.

It has to be. We've probably all had fractures

Tem que ser. Todos tivemos fracturas

at some point or other.

em algum momento.

And one of the ways that you can think

Um modo em que podem pensar

about repairing your fracture

para reparar a vossa fractura

is this procedure here, called an iliac crest harvest.

é este procedimento, designado colheita da crista ilíaca.

And what the surgeon might do

O que o cirurgião poderá fazer

is take some bone from your iliac crest,

é retirar algum osso da vossa crista ilíaca,

which is just here,

que está mesmo aqui,

and then transplant that somewhere else in the body.

e depois transplantá-la para outro ponto do corpo.

And it actually works really well,

E resulta mesmo bem

because it's your own bone,

porque é o vosso próprio osso,

and it's well vascularized,

e é bastante vascularizado,

which means it's got a really good blood supply.

ou seja, tem um bom fornecimento de sangue.

But the problem is, there's only so much you can take,

Mas o problema é que há um limite para o que podem retirar.

and also when you do that operation,

Também, quando se faz essa operação,

your patients might actually have significant pain

os nossos pacientes podem ter dores consideráveis

in that defect site even two years after the operation.

no local afectado até dois anos após a operação.

So what we were thinking is,

Então o que pensámos

there's a tremendous need for bone repair, of course,

é que há uma grande necessidade de reparação óssea, claro,

but this iliac crest-type approach

mas esta abordagem da crista ilíaca

really has a lot of limitations to it,

tem realmente várias limitações.

and could we perhaps recreate

Talvez pudéssemos provocar

the generation of bone within the body

a regeneração óssea no corpo a pedido

on demand and then be able to transplant it

e depois poder transplantá-la

without these very, very painful aftereffects

sem estes efeitos secundários muito, muito dolorosos

that you would have with the iliac crest harvest?

que temos com a colheita da crista ilíaca.

And so this is what we did, and the way we did it

Então foi o que fizemos, e o modo como o fizemos

was by coming back to this typical tissue-engineering approach

foi regressar a esta abordagem típica de engenharia de tecidos

but actually thinking about it rather differently.

mas pensada de forma bem diferente.

And we simplified it a lot,

Simplificámo-la bastante,

so we got rid of a lot of these steps.

e livrámo-nos de várias destas etapas.

We got rid of the need to harvest cells from the patient,

Livrámo-nos da necessidade de colher células do paciente,

we got rid of the need to put in really fancy chemistries,

Livrámo-nos da necessidade de químicas elaboradas

and we got rid of the need

e livrámo-nos da necessidade

to culture these scaffolds in the lab.

de cultivar estes esqueletos no laboratório.

And what we really focused on

E no que nos focámos realmente

was our material system and making it quite simple,

foi no nosso sistema de materiais e torná-lo muito simples.

but because we used it in a really clever way,

Mas como o usávamos de um modo mesmo inteligente,

we were able to generate enormous amounts of bone

fomos capazes de criar uma grande quantidade de osso

using this approach.

usando esta abordagem.

So we were using the body

Então estávamos a usar o corpo como catalisador

as really the catalyst to help us

to make lots of new bone.

para nos ajudar a fazer muito osso novo

And it's an approach that we call

É uma abordagem a que chamamos

the in vivo bioreactor, and we were able to make

biorreactor in vivo.

Fomos capazes de fazer enormes quantidade de osso

enormous amounts of bone using this approach.

usando esta abordagem.

And I'll talk you through this.

Vou dizer-vos como foi.

So what we do is,

O que fazemos é isto:

in humans, we all have a layer of stem cells

Todos os humanos têm células estaminais

on the outside of our long bones.

no exterior dos ossos longos.

That layer is called the periosteum.

Essa camada designa-se periósteo.

And that layer is actually normally

E essa camada é normalmente

very, very tightly bound to the underlying bone,

muito, muito ligada ao osso subjacente

and it's got stem cells in it.

e tem células estaminais.

Those stem cells are really important

Essas células estaminais são mesmo importantes

in the embryo when it develops,

no embrião, quando se desenvolve,

and they also sort of wake up if you have a fracture

e de certo modo acordam quando há uma fractura

to help you with repairing the bone.

para ajudar a reparar o osso.

So we take that periosteum layer

Então pegamos na camada do periósteo

and we developed a way to inject underneath it

e desenvolvemos um modo de injectar um líquido por baixo

a liquid that then, within 30 seconds,

que, em 30 segundos,

would turn into quite a rigid gel

se torna um gel rígido

and can actually lift the periosteum away from the bone.

que consegue despegar o periósteo do osso.

So it creates, in essence, an artificial cavity

Assim, cria uma cavidade artificial

that is right next to both the bone

que está muito próxima do osso

but also this really rich layer of stem cells.

e desta camada rica em células estaminais.

And we go in through a pinhole incision

Fazemos uma incisão muito pequena

so that no other cells from the body can get in,

de modo a que outras células do corpo não possam passar.

and what happens is that that artificial in vivo bioreactor cavity

O que sucede é que essa cavidade artificial do biorreactor in vivo

can then lead to the proliferation of these stem cells,

pode levar à proliferação destas células estaminais

and they can form lots of new tissue,

e elas podem formar muito tecido novo.

and then over time, you can harvest that tissue

Depois, ao longo do tempo, pode colher-se esse tecido

and use it elsewhere in the body.

e usá-lo em qualquer ponto do corpo.

This is a histology slide

Isto é um diapositivo de histologia

of what we see when we do that,

do que vemos nessa operação.

and essentially what we see

Essencialmente o que vemos

is very large amounts of bone.

são grandes quantidades de osso.

So in this picture, you can see the middle of the leg,

Nesta imagem, podem ver o interior da perna,

so the bone marrow,

a medula óssea,

then you can see the original bone,

a seguir podem ver o osso original,

and you can see where that original bone finishes,

e podem ver onde o osso original termina.

and just to the left of that is the new bone

Mesmo à esquerda está o osso novo

that's grown within that bioreactor cavity,

que cresceu nessa cavidade do biorreactor

and you can actually make it even larger.

e pode tornar-se maior.

And that demarcation that you can see

Essa delimitação que podem ver

between the original bone and the new bone

entre o osso original e o osso novo

acts as a very slight point of weakness,

actua como um ligeiro ponto de fraqueza,

so actually now the surgeon can come along,

de modo que pode vir o cirurgião.

can harvest away that new bone,

fazer a colheita desse osso novo,

and the periosteum can grow back,

e o periósteo pode voltar a crescer,

so you're left with the leg

de modo que a perna volta a ficar

in the same sort of state

no estado em que estaria

as if you hadn't operated on it in the first place.

se nunca tivesse sido operada.

So it's very, very low in terms of after-pain

Assim é muito menos doloroso

compared to an iliac crest harvest.

comparado com a colheita da crista ilíaca.

And you can grow different amounts of bone

Podem criar-se diferentes quantidades de osso

depending on how much gel you put in there,

dependendo de quanto gel se coloca lá dentro,

so it really is an on demand sort of procedure.

por isso é uma espécie de procedimento a pedido.

Now, at the time that we did this,

Quando fizemos isto,

this received a lot of attention in the press,

isto recebeu muita atenção da imprensa,

because it was a really nice way

porque era uma forma muito boa

of generating new bone,

de gerar novo osso.

and we got many, many contacts

Tivemos muitos, muitos contactos

from different people that were interested in using this.

de diferentes pessoas interessadas em usar isto.

And I'm just going to tell you,

Vou apenas dizer-vos:

sometimes those contacts are very strange,

por vezes esses contactos são muito estranhos,

slightly unexpected,

ligeiramente inesperados.

and the very most interesting,

O contacto mais interessante que tive

let me put it that way, contact that I had,

—se assim posso dizê-lo —

was actually from a team of American footballers

foi uma equipa de jogadores de futebol americano

that all wanted to have double-thickness skulls

que queriam ter crânios mais espessos

made on their head.

nas suas cabeças.

(Risos)

And so you do get these kinds of contacts,

Há este tipo de contactos

and of course, being British

e, claro, sendo inglesa

and also growing up in France,

e tendo crescido em França,

I tend to be very blunt,

tenho tendência a ser muito brusca,

and so I had to explain to them very nicely

e por isso tive que explicar de modo simpático

that in their particular case,

que naquele caso em particular,

there probably wasn't that much in there

provavelmente não havia muito lá dentro

to protect in the first place.

para proteger, para começar.

(Laughter)

(Risos)

(Applause)

(Aplausos)

So this was our approach,

Então esta foi a nossa abordagem,

and it was simple materials,

e com materiais simples,

but we thought about it carefully.

mas pensámos sobre isso cuidadosamente.

And actually we know that those cells

Sabemos que essas células

in the body, in the embryo, as they develop

no corpo, no embrião, à medida que crescem,

can form a different kind of tissue, cartilage,

podem formar um tipo diferente de tecido, de cartilagem.

and so we developed a gel that was slightly different

Desenvolvemos um gel um pouco diferente

in nature and slightly different chemistry,

e com uma química ligeiramente diferente.

put it in there, and we were able to get

Introduzimo-lo e conseguimos obter

100 percent cartilage instead.

100 por cento cartilagem.

And this approach works really well, I think,

Penso que esta abordagem funciona mesmo bem.

for pre-planned procedures,

para procedimentos pré-planeados,

but it's something you do have to pre-plan.

mas é algo que tem que ser pré-planeado.

So for other kinds of operations,

Para outro tipo de operações,

there's definitely a need for other

há a necessidade de outras abordagens

scaffold-based approaches.

baseadas no esqueleto.

And when you think about designing

Quando se pensa em desenhar

those other scaffolds, actually,

esses outros esqueletos,

you need a really multi-disciplinary team.

é necessária uma equipa multidisciplinar.

And so our team has chemists,

Por isso a nossa equipa tem químicos,

it has cell biologists, surgeons, physicists even,

biólogos celulares, cirurgiões, até físicos.

and those people all come together

Todas essas pessoas juntam-se

and we think really hard about designing the materials.

e pensamos arduamente em desenhar os materiais.

But we want to make them have enough information

Mas queremos que tenham informação suficiente

that we can get the cells to do what we want,

para que as células façam o que nós queremos

but not be so complex as to make it difficult

mas não tão complexa que torne difícil

to get to clinic.

usar na prática clínica.

And so one of the things we think about a lot

Assim, uma das coisas em que pensamos muito

is really trying to understand

é tentar mesmo perceber

the structure of the tissues in the body.

a estrutura dos tecidos no corpo.

And so if we think of bone,

Se pensarmos no osso,

obviously my own favorite tissue,

— obviamente o meu tecido favorito —

we zoom in, we can see,

fazemos "zoom", podemos ver,

even if you don't know anything about bone structure,

mesmo não sabendo nada sobre a estrutura do osso,

it's beautifully organized, really beautifully organized.

é organizado de uma forma mesmo maravilhosa.

We've lots of blood vessels in there.

Tem muitos vasos sanguíneos.

And if we zoom in again, we see that the cells

Se fizermos "zoom" de novo, vemos que

are actually surrounded by a 3D matrix

as células estão rodeadas de uma matriz 3D

of nano-scale fibers, and they give a lot

de fibras nanométricas,

of information to the cells.

e dão muita informação às células.

And if we zoom in again,

E se fizermos "zoom" de novo,

actually in the case of bone, the matrix

no caso do osso,

around the cells is beautifully organized

a matriz à volta das células está maravilhosamente organizada

at the nano scale, and it's a hybrid material

à escala nano, e é um material híbrido,

that's part organic, part inorganic.

parte orgânico, parte inorgânico.

And that's led to a whole field, really,

Isso levou a todo um campo

that has looked at developing materials

que se dedicou a desenvolver materiais

that have this hybrid kind of structure.

com este tipo híbrido de estrutura.

And so I'm showing here just two examples

Estou a mostrar aqui apenas dois exemplos

where we've made some materials that have that sort of structure,

em que fizémos alguns materiais que têm esse tipo de estrutura

and you can really tailor it.

e que podem ser modelados.

You can see here a very squishy one

Podem ver aqui um muito gelatinoso

and now a material that's also this hybrid sort of material

e agora um material também do tipo híbrido

but actually has remarkable toughness,

mas com uma dureza notável,

and it's no longer brittle.

e que já não é quebradiço.

And an inorganic material would normally be really brittle,

Um material inorgânico seria normalmente muito quebradiço

and you wouldn't be able to have

e não seria possível

that sort of strength and toughness in it.

ter este comprimento e dureza.

One other thing I want to quickly mention is that

Outra coisa que quero mencionar rapidamente

many of the scaffolds we make are porous, and they have to be,

é que muitos dos esqueletos que fazemos são porosos, e têm que o ser,

because you want blood vessels to grow in there.

porque se quer que cresçam vasos sanguíneos no interior.

But the pores are actually oftentimes

Mas os poros são muitas vezes

much bigger than the cells,

muito maiores do que as células

and so even though it's 3D,

e, mesmo sendo 3D,

the cell might see it more as a slightly curved surface,

a célula poderá vê-lo mais como uma superfície ligeiramente curva,

and that's a little bit unnatural.

e isso é pouco natural.

And so one of the things you can think about doing

Então algo que se pode pensar fazer

is actually making scaffolds with slightly different dimensions

é fazer esqueletos com dimensões ligeiramente diferentes

that might be able to surround your cells in 3D

que poderão rodear as células em 3D

and give them a little bit more information.

e dar-lhes mais alguma informação.

And there's a lot of work going on in both of these areas.

Há muito trabalho em curso em ambas estas áreas.

Now finally, I just want to talk a little bit about

Finalmente, só quero falar um pouco

applying this sort of thing to cardiovascular disease,

sobre aplicar estas coisas a doenças cardíacas

because this is a really big clinical problem.

porque é um grande problema clínico.

And one of the things that we know is that,

Uma das coisas que sabemos

unfortunately, if you have a heart attack,

é que, infelizmente, se tivermos um ataque cardíaco

then that tissue can start to die,

esse tecido pode começar a morrer

and your outcome may not be very good over time.

e o resultado pode não ser muito bom ao longo do tempo.

And it would be really great, actually,

Seria muito bom, na verdade,

if we could stop that dead tissue

se pudéssemos impedir esse tecido morto

either from dying or help it to regenerate.

de morrer ou ajudá-lo a regenerar.

And there's lots and lots of stem cell trials going on worldwide,

Há imensos ensaios com células estaminais por todo o mundo

and they use many different types of cells,

e usam muitos tipos diferentes de células,

but one common theme that seems to be coming out

mas um tópico comum que parece surgir

is that actually, very often, those cells will die

é que muitas vezes, essas células vão morrer

once you've implanted them.

uma vez implantadas.

And you can either put them into the heart

Podem ser colocadas no coração

or into the blood system,

ou no sistema sanguíneo,

but either way, we don't seem to be able

mas em qualquer caso, parece que não conseguimos

to get quite the right number of cells

obter o número certo de células

getting to the location we want them to

no local em que as queremos

and being able to deliver the sort of beautiful

e conseguir proporcionar o tipo maravilhoso

cell regeneration that we would like to have

de regeneração celular que gostaríamos de ter

to get good clinical outcomes.

para ter bons resultados clínicos.

And so some of the things that we're thinking of,

Assim algumas das coisas em que estamos a pensar

and many other people in the field are thinking of,

e em que muitas outras pessoas na área estão a pensar

are actually developing materials for that.

é desenvolver materiais com esse fim.

But there's a difference here.

Mas há aqui uma diferença.

We still need chemistry, we still need mechanics,

Ainda precisamos de químicos, mecânicos,

we still need really interesting topography,

de topografia deveras interessante,

and we still need really interesting ways to surround the cells.

e de formas muitos interessantes de rodear as células.

But now, the cells also

Mas também as células

would probably quite like a material

gostariam provavelmente de um material

that's going to be able to be conductive,

que pudesse ser condutor,

because the cells themselves will respond very well

porque as células responderão muito bem

and will actually conduct signals between themselves.

e conduzirão sinais entre si.

You can see them now

Podem vê-las agora

beating synchronously on these materials,

batendo em sincronia nestes materiais,

and that's a very, very exciting development

e é um desenvolvimento muito excitante

that's going on.

que está a decorrer.

So just to wrap up, I'd like to actually say that

Então para concluir, gostaria de dizer

que poder trabalhar nesta área

being able to work in this sort of field,

all of us that work in this field

— todos nós que trabalhamos nesta área —

that's not only super-exciting science,

não é só ciência super excitante,

but also has the potential

mas tem o potencial

to impact on patients,

de ter impacto nos pacientes,

however big or small they are,

quer sejam grandes ou pequenos,

is really a great privilege.

é realmente um grande privilégio.

And so for that, I'd like to thank all of you as well.

E por isso, gostaria de vos agradecer a todos também.

Thank you.

Obrigado.

(Applause)

(Aplausos)